SYND4/SDC4/Syndecan-4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400502-ACT

SDC4 は、膜貫通型のヘパラン硫酸プロテオグリカンであるシンデカン-4（SYND4）をコードしており、細胞外マトリックスタンパク質、ケモカイン、増殖因子に対する共受容体として機能することで、細胞―マトリックス間シグナル伝達を協調的に制御します。SYND4 はインテグリンや細胞骨格アダプターとの相互作用を介して、フォーカルアドヒージョンの形成、PKCα／Rho ファミリー GTPase シグナル伝達、および細胞移動、メカノトランスダクション、創傷に伴うリモデリングを制御する下流経路を調節します。SDC4 の発現変化やシェディングは、炎症性シグナル伝達、血管機能障害、線維化関連プロセスと関連づけられており、腫瘍―間質相互作用や浸潤性細胞挙動といった文脈でしばしば研究されています。リガンド提示と接着動態を細胞表面で組織化する因子として、SYND4 は細胞外シグナル伝達ネットワークを解析するための結節点として広く用いられ、運動能、バリア機能、マトリックスリモデリングなどの表現型の検討に利用されています。

SYND4/SDC4/Syndecan-4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SDC4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SYND4/SDC4/Syndecan-4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SDC4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSDC4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SYND4/SDC4/Syndecan-4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSDC4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSYND4/SDC4/Syndecan-4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSDC4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSYND4/SDC4/Syndecan-4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。