SVCT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401350

Übersicht

SLC23A2 kodiert den natriumabhängigen Vitamin‑C‑Transporter SVCT2, einen hochaffinen Membrantransporter, der die zelluläre Aufnahme von Ascorbat vermittelt und so das intrazelluläre Redoxgleichgewicht aufrechterhält. Durch die Unterstützung ascorbatabhängiger Dioxygenasen beeinflusst SVCT2 die Kollagenreifung, die epigenetische Regulation über TET-/JmjC‑Enzyme sowie die Hypoxiesignalgebung über Prolylhydroxylasen und wirkt damit auf die Homöostase der extrazellulären Matrix und transkriptionelle Programme. Die Aktivität von SVCT2 ist zudem mit der Mitochondrienfunktion und oxidativen Stressantworten in metabolisch aktiven Geweben verknüpft. Veränderte SLC23A2‑Expression oder ein gestörter Ascorbat‑Transport wurden mit einer erhöhten Anfälligkeit für oxidative Schädigung sowie mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Neurobiologie, kardiovaskuläre Biologie und den Stoffwechsel von Krebszellen relevant sind.

Das SVCT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC23A2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC23A2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC23A2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SVCT2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC23A2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SVCT2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC23A2-Exone abzielen, die für die SVCT2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC23A2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SVCT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SVCT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC23A2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SVCT2 HDR-Plasmid (h) und SVCT2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC23A2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC23A2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.