SVCT1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403006-ACT

SLC23A1 kodiert den humanen natriumabhängigen Vitamin‑C‑Transporter 1 (SVCT1), einen Symporter der Plasmamembran, der die hochkapazitive Aufnahme von L‑Ascorbat gekoppelt an Natriumgradienten vermittelt. Die SVCT1‑Aktivität unterstützt die zelluläre Redoxhomöostase, indem sie intrazelluläre Ascorbatpools aufrechterhält, die die antioxidative Abwehr, die Kollagenhydroxylierung und die dioxygenaseabhängige epigenetische Regulation beeinflussen. In Epithelgeweben wie Darm und Niere trägt SVCT1 zur diätetischen Aufnahme und zur renalen Rückresorption von Vitamin C bei und prägt damit die systemische Ascorbatverfügbarkeit. Veränderte Funktion oder Expression von SLC23A1 wurde im Zusammenhang mit einer erhöhten Anfälligkeit für oxidativen Stress sowie mit metabolischen und inflammatorischen Phänotypen untersucht, bei denen der Vitamin‑C‑Transport stressantwortbezogene Signalwege modulieren kann.

SVCT1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC23A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SVCT1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC23A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC23A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SVCT1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC23A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SVCT1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SVCT1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC23A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.