Plasmide CRISPR/Cas9 KO Sva (m): sc-423225

Présentation

Sva (steroidogenic factor 1–associated) est une protéine nucléaire impliquée dans la régulation de l’expression des gènes stéroïdogènes via des interactions avec des programmes transcriptionnels qui gouvernent le développement endocrinien et la biosynthèse hormonale. Dans les cellules de souris, Sva est associée à la modulation de la transcription dépendante des récepteurs nucléaires, influençant des voies qui intègrent le contexte de la chromatine à une régulation génique spécifique des tissus. Une altération du contrôle des réseaux transcriptionnels stéroïdogènes peut affecter la différenciation des gonades et des glandes surrénales, ainsi que l’homéostasie endocrinienne en aval, faisant de Sva une cible pertinente pour des études mécanistiques des phénotypes développementaux et métaboliques. Les approches de perte ou de gain de fonction visant Sva permettent de disséquer la circuiterie transcriptionnelle qui couple les états de différenciation cellulaire à la signalisation sensible aux hormones.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Sva (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sva dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sva, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sva à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Sva.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sva pour l'étude de la signalisation de Sva, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sva essentiels à la fonction de Sva
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sva pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Sva plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Sva plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sva. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Sva plasmide HDR (m) et le Sva (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sva pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sva définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.