Plasmide CRISPR d'Activation (h) Stim2: sc-403491-ACT

STIM2 (stromal interaction molecule 2) code un capteur de Ca²⁺ du réticulum endoplasmique qui couple l’épuisement des réserves de calcium luminales à l’entrée de calcium dépendante des stocks (SOCE) en recrutant les canaux ORAI aux jonctions entre le RE et la membrane plasmique. En modulant les signaux calciques cytosoliques, Stim2 influence le couplage excitation–transcription, la signalisation synaptique et immunitaire, ainsi que des programmes transcriptionnels dépendants du calcium, notamment NFAT et d’autres voies sensibles au stress. Chez l’humain, STIM2 a été associé à une altération de l’homéostasie calcique dans des contextes neurodégénératifs et neuropsychiatriques, et il est également étudié en lien avec l’activation des cellules immunitaires et la régulation métabolique. Ses propriétés de détection basale, comparées à celles de STIM1, en font un nœud utile pour disséquer les points de consigne et la dynamique de la signalisation calcique dans des modèles physiologiques et de maladie.

Stim2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STIM2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Stim2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STIM2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STIM2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Stim2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STIM2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Stim2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Stim2 dans les cellules tumorales présentant une expression de STIM2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.