Stim2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403491-ACT

STIM2（ストローマル相互作用分子2）は、小胞体（ER）のCa²⁺センサーをコードしており、ER内腔のカルシウム貯蔵が枯渇した際に、ER–細胞膜接合部でORAIチャネルを介してストア作動性カルシウム流入（SOCE）へと結び付けます。細胞質カルシウムシグナルを形成することで、Stim2は興奮—転写連関、シナプスおよび免疫シグナル伝達、ならびにNFATを含むストレス応答性経路などのカルシウム依存的な転写プログラムに影響を与えます。ヒトSTIM2は、神経変性疾患や神経精神疾患の文脈におけるカルシウム恒常性の変化と関連付けられており、免疫細胞活性化や代謝調節との関連でも研究されています。STIM1と比べた基礎的な感知特性により、STIM2は生理および疾患関連モデルにおけるカルシウムシグナルのセットポイントやダイナミクスを解明するための有用な結節点となります。

Stim2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性STIM2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Stim2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における STIM2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSTIM2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Stim2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSTIM2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるStim2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSTIM2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるStim2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。