STEAP2 Double Nickase Plasmid (m): sc-428702-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das STEAP2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- STEAP2 Double-Nickase-Plasmid (m) und STEAP2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Steap2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
STEAP2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-428702-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
STEAP2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-428702-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Steap2 kodiert das Six-Transmembran-Epithelantigen der Prostata 2 (STEAP2), eine membranassoziierte Metalloreduktase, die an der Eisen- und Kupferhomöostase beteiligt ist, indem sie dreiwertige Eisen- und zweiwertige Kupferionen reduziert, um die zelluläre Metallaufnahme zu erleichtern. In Mauszellen lokalisiert STEAP2 in endosomalen und Plasmamembran-Kompartimenten und trägt zur Redoxregulation, zum vesikulären Transport sowie zu Stoffwechselprozessen bei, die mit metallabhängigen Enzymen verknüpft sind. Eine veränderte Aktivität der STEAP-Familie wurde in verschiedenen Gewebekontexten mit oxidativem Stress, dysregulierter Proliferation und Veränderungen von Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht. Steap2 ist daher von Interesse, um Signalwege der Metallionenhandhabung und deren Einfluss auf zelluläre Signalgebung sowie krankheitsassoziierte Phänotypen in vivo und in vitro zu untersuchen.
STEAP2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Steap2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Steap2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Steap2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Steap2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.