Particules Lentivirales d'Activation (m) STC1: sc-423182-LAC

La stanniocalcine 1 (Stc1) de la souris code la glycoprotéine sécrétée STC1, un facteur pléiotrope de type hormonal impliqué dans l’homéostasie du calcium et du phosphate, ainsi que dans de vastes voies de signalisation d’adaptation au stress. STC1 influence le métabolisme cellulaire, l’équilibre rédox et la fonction mitochondriale, et a été associée à des voies régissant la prolifération, l’apoptose, les programmes angiogéniques et les réponses inflammatoires. Dans divers tissus, l’expression de STC1 est modulée par l’hypoxie et la signalisation des facteurs de croissance, et peut remodeler la communication cellule–cellule au sein des microenvironnements. Une dérégulation de STC1 a été associée à des phénotypes pertinents pour la biologie du cancer, les lésions ischémiques, la fibrose et des contextes de maladies à médiation immunitaire, ce qui fait de Stc1 une cible utile pour des études mécanistiques.

Les particules d'activation lentivirales STC1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Stc1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales STC1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Stc1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de STC1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Stc1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.