Plasmide CRISPR/Cas9 KO SRp30c (h): sc-403790

Présentation

SRSF9 code pour le facteur d’épissage riche en sérine/arginine SRp30c, une protéine liant l’ARN qui contribue au choix des sites d’épissage et à la définition des exons lors du traitement du pré‑ARNm. Grâce à ses interactions avec des activateurs exoniques de l’épissage et d’autres protéines SR, SRp30c aide à coordonner des programmes d’épissage alternatif qui déterminent le répertoire d’isoformes produites, en couplant le traitement de l’ARN à la transcription et au devenir ultérieur de l’ARNm. Ces décisions d’épissage peuvent influencer le contrôle du cycle cellulaire, les réponses au stress et les réseaux d’expression génique associés à la différenciation. Une activité dérégulée des protéines SR et des profils d’épissage altérés sont largement impliqués dans la biologie des cancers et des maladies neurodégénératives, faisant de SRSF9 un nœud pertinent pour des études mécanistiques des phénotypes induits par l’épissage.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SRp30c (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SRSF9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SRSF9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SRSF9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SRp30c.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SRSF9 pour l'étude de la signalisation de SRp30c, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SRSF9 essentiels à la fonction de SRp30c
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SRSF9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SRp30c plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SRp30c plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SRSF9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SRp30c plasmide HDR (h) et le SRp30c (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SRSF9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SRSF9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.