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SR-2B双切口酶质粒(m) | sc-420994-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SR-2B双切口酶质粒(m2) | sc-420994-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
小鼠 Htr2b 编码 5-羟色胺受体 SR-2B(5-HT2B),这是一种 G 蛋白偶联受体(GPCR),主要与 Gq/11 偶联,从而激活磷脂酶 C 信号传导、促进肌醇磷酸生成、动员细胞内 Ca2+,并进一步驱动下游 PKC/MAPK 通路活性。SR-2B 参与 5-羟色胺对血管张力的调控、心脏发育与重塑,以及中枢神经系统(CNS)过程(包括突触信号传递与神经炎症反应)。Htr2b 活性改变已被认为与心血管功能障碍和纤维化重塑相关通路有关,也与因 5-羟色胺能环路失衡而出现的神经精神表型相关。这些特征使 Htr2b 成为在小鼠模型中解析 GPCR 驱动的第二信使信号、转录反应以及组织特异性 5-羟色胺调控的有用靶点。
SR-2B 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Htr2b 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Htr2b内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Htr2b的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Htr2b基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。