SR-2B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402574-ACT

Das humane Gen **HTR2B** kodiert den Serotoninrezeptor **2B (SR-2B)**, einen G-Protein-gekoppelten Rezeptor, der überwiegend an **Gq/11** koppelt und dadurch die **Phospholipase‑C‑Signalübertragung**, den **Inositolphosphat-Umsatz**, die **intrazelluläre Ca2+-Mobilisierung** sowie die **PKC‑abhängige Aktivität des MAPK/ERK‑Signalwegs** stimuliert. SR-2B moduliert **Transkriptionsprogramme**, die mit **Zellwachstum**, **Remodeling der extrazellulären Matrix** und **Zytoskelettdynamik** verknüpft sind, und integriert serotonerge Signale in gewebespezifische Signalnetzwerke. Veränderungen von Expression und Signalgebung von **HTR2B** wurden mit **kardiovaskulärem Remodeling** und der **Biologie von Herzklappen** in Verbindung gebracht; zudem wurde eine veränderte Rezeptoraktivität in **neuropsychiatrischen** und **fibrotischen** Kontexten beschrieben, was mechanistische Studien zur serotoninvermittelten Pathophysiologie unterstützt. Diese Eigenschaften machen SR-2B zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der **GPCR‑Signaltransduktion**, **rezeptorvoreingenommener (biased) Signalgebung** und nachgeschalteter **genregulatorischer Antworten** in humanen Zellmodellen.

SR-2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HTR2B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SR-2B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HTR2B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HTR2B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SR-2B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HTR2B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SR-2B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SR-2B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HTR2B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.