Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
SR-2A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401532-ACT
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- SR-2A CRISPR Activation Plasmid (h) ist ein Transkriptionsaktivierungs System (SAM) welches für die gezielte Verstärkung der Genexpression bestimmt ist
- SR-2A CRISPR Aktivierungsplasmide (h) bestehen aus 3 Plasmiden im Massenverhältnis 1:1:1: ein Plasmid kodiert für die deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungsdomaine VP64 sowie ein Gen für die Blasticidin Resistenz; ein zweites Plasmid kodierend für das MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein sowie ein Gen für die Hygromycin Resistenz; ein drittes Plasmid kodierd für die Ziel-spezifische 20 nt guide RNA fusioniert an zwei MS2 RNA Aptamere sowie ein Gen für die Puromycin Resistenz.
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die vom SR-2A CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) und vom SR-2A CRISPR-Aktivierungsplasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen stromaufwärts der HTR2A-Transkriptionsstartstelle ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SR-2A: sc-166775
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SR-2A CRISPR Activation Plasmid (h) | sc-401532-ACT | 20 µg | $397.00 |
HTR2A kodiert den menschlichen Serotoninrezeptor 5‑HT2A (SR‑2A), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der hauptsächlich an Gq/11 koppelt, um die Phospholipase‑C‑Signalübertragung, die Inositolphosphat‑Produktion, die intrazelluläre Ca2+-Mobilisierung sowie PKC‑abhängige nachgeschaltete Signalwege zu stimulieren. Die SR‑2A‑Aktivität überschneidet sich mit MAPK/ERK und anderen aktivitätsabhängigen Transkriptionsprogrammen, die neuronale Erregbarkeit, synaptische Plastizität und die Funktion kortikaler Schaltkreise prägen. Im zentralen Nervensystem werden Expression und Signaldynamik von HTR2A häufig im Zusammenhang mit der Integration von Neurotransmittern und dem Rezeptor‑Crosstalk untersucht, die verhaltensrelevante Netzwerkzustände beeinflussen. Veränderte serotonerge Signalübertragung unter Beteiligung von SR‑2A wurde in der Literatur mit der Biologie neuropsychiatrischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, darunter Schizophrenie, affektive Störungen und migränebezogene Signalwege, was seine Nutzung als mechanistisches Ziel in zellulären und systemneurowissenschaftlichen Modellen stützt.
SR-2A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HTR2A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.
SR-2A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HTR2A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.
Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HTR2A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SR-2A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HTR2A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SR-2A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SR-2A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HTR2A-Ausdruck.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.