Squalene epoxidase Plasmide Double Nickase (h): sc-402870-NIC

SQLE codifica la squalene epossidasi, una monoossigenasi flavino-dipendente che catalizza l’epossidazione dello squalene a 2,3-ossidosqualene, un passaggio precoce che influenza la velocità nella biosintesi del colesterolo e degli steroli. In quanto enzima associato al reticolo endoplasmatico, contribuisce a regolare l’omeostasi degli steroli e si integra con il flusso della via del mevalonato, la dinamica delle goccioline lipidiche e il controllo a feedback della composizione di membrana. La perturbazione dell’attività di SQLE può rimodellare i profili lipidici cellulari, con effetti sulle piattaforme di segnalazione e sull’adattamento metabolico in condizioni di stress. Un’alterata regolazione della biosintesi degli steroli che coinvolge SQLE è stata associata a fenotipi legati alla dislipidemia e alla riprogrammazione metabolica osservata in molteplici contesti patologici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca sul metabolismo lipidico.

Squalene epoxidase Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SQLE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SQLE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SQLE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SQLE interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.