SPNS2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405481-ACT

SPNS2（spinster homolog 2）は、多回膜貫通型の膜輸送体をコードし、細胞外スフィンゴシン-1-リン酸（S1P）の利用可能性を調節することで、細胞移動、血管およびリンパ管の恒常性、ならびに免疫細胞の移動（トラフィッキング）を協調させるS1P勾配の形成に関与します。S1Pの輸送（細胞外への排出）を制御することにより、SPNS2はGPCRを介したS1P受容体シグナル伝達と、バリア機能や細胞骨格リモデリングに関与するPI3K/AKT、MAPK、RhoファミリーGTPase回路などの下流経路に影響を与えます。SPNS2活性の変化は、実験系において炎症応答の異常や内皮／リンパ管の表現型異常と関連づけられており、免疫制御および血管生物学の研究において重要です。スフィンゴ脂質代謝とシグナル伝達における結節点として、SPNS2は組織微小環境のシグナルや細胞間コミュニケーションへの影響という観点から、しばしば解析対象となります。

SPNS2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPNS2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SPNS2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPNS2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPNS2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SPNS2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPNS2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSPNS2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPNS2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSPNS2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。