spectrin β II Plasmide Double Nickase (h): sc-401818-NIC

SPTBN1 codifica la spettina βII umana, un componente fondamentale del citoscheletro spettina–actina associato alla membrana, che sostiene la stabilità della membrana plasmatica e organizza l’architettura corticale. La spettina βII contribuisce alla forma cellulare, alla resilienza meccanica e al traffico intracellulare fungendo da impalcatura per canali ionici, recettori e complessi di segnalazione in domini di membrana specializzati. Attraverso interazioni con anchirine e actina, aiuta a coordinare il rimodellamento del citoscheletro, il trasporto vescicolare e la polarità cellulare durante lo sviluppo e nei tessuti differenziati. Alterazioni della funzione di SPTBN1 sono state collegate a fenotipi neuroevolutivi e a disfunzioni del citoscheletro, rendendolo un bersaglio utile per studiare i meccanismi che collegano l’impalcatura di membrana alla segnalazione neuronale e all’omeostasi cellulare.

spectrin β II Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SPTBN1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SPTBN1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SPTBN1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SPTBN1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.