Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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spectrin β II Double Nickase Plasmid (h): sc-401818-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das spectrin β II Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- spectrin β II Double-Nickase-Plasmid (h) und spectrin β II Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SPTBN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: spectrin β II: sc-515592
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
spectrin β II Double Nickase Plasmid (h) | sc-401818-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
spectrin β II Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401818-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SPTBN1 kodiert das humane Spektrin βII, eine zentrale Komponente des membranassoziierten Spektrin-Actin-Zytoskeletts, das die Stabilität der Plasmamembran unterstützt und die kortikale Architektur organisiert. Spektrin βII trägt zur Zellform, mechanischen Widerstandsfähigkeit und zum intrazellulären Transport bei, indem es Ionenkanäle, Rezeptoren und Signalkomplexe in spezialisierten Membrandomänen als Gerüst (Scaffold) zusammenführt. Über Interaktionen mit Ankyrinen und Actin hilft es, die Zytoskelett-Remodellierung, den Vesikeltransport und die Zellpolarität während der Entwicklung und in differenzierten Geweben zu koordinieren. Eine veränderte SPTBN1-Funktion wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen und Zytoskelett-Dysfunktionen in Verbindung gebracht und ist daher ein nützliches Ziel, um Mechanismen zu untersuchen, die Membran-Scaffolding mit neuronaler Signalübertragung und zellulärer Homöostase verknüpfen.
spectrin β II Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SPTBN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SPTBN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SPTBN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SPTBN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.