SPATA18 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-407015-ACT

ヒトSPATA18は、ミトコンドリアに関連する因子をコードしており、ミトコンドリアの品質管理や、マイトファジー様プロセスを介した損傷ミトコンドリアのストレス応答性除去に関与するとされています。酸化ストレスに対する細胞応答やミトコンドリア膜の完全性維持とも関連し、SPATA18の活性は、エネルギー代謝、活性酸素種（ROS）恒常性、ならびにオルガネラのターンオーバーを制御するより広範な経路と結び付けられます。SPATA18の制御異常は、細胞ストレスやゲノム維持プログラムに関わる状況で報告されており、ミトコンドリア機能不全や増殖関連表現型の研究において重要です。これらの機能により、SPATA18は、ミトコンドリア監視機構が細胞運命の決定や疾患関連の代謝リモデリングとどのように接続しているかを調べる上で、有用な解析ノードとなります。

SPATA18 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SPATA18の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SPATA18 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SPATA18 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSPATA18転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SPATA18の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSPATA18遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSPATA18依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSPATA18発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSPATA18経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。