SP140 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-409816-LAC

SP140 (humano) codifica um leitor nuclear de cromatina expresso predominantemente em células imunes, onde ajuda a interpretar marcas epigenéticas para coordenar programas transcricionais específicos de linhagem. A proteína SP140 contém domínios associados à ligação à cromatina e à regulação transcricional, o que a relaciona ao controle de redes gênicas inflamatórias e do estado de diferenciação nos compartimentos mieloide e linfoide. Por meio da modulação da atividade de enhancers e promotores, o SP140 contribui para vias que regulam a sinalização por citocinas, a ativação da imunidade inata e as respostas antimicrobianas. Estudos genéticos e de expressão associaram a desregulação de SP140 à suscetibilidade a doenças mediadas pelo sistema imune, tornando-o um alvo útil para investigar mecanismos epigenéticos que moldam fenótipos inflamatórios.

As Partículas de Ativação Lentivirais SP140 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SP140 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais SP140 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SP140, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de SP140. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SP140 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.