Sox9 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423093-ACT

マウスSox9は、高移動度群（HMG）ボックス型の転写因子をコードしており、系譜（ラインエージ）指定と組織形態形成のマスター制御因子として機能する。TGF‑β/BMP、Wnt/β‑カテニン、Hedgehog経路などの発生シグナル入力を統合し、軟骨形成、細胞外マトリックス産生、上皮分化に関わるプログラムを制御する。Sox9の活性は、Col2a1やAcanといった遺伝子の転写制御を通じて細胞運命決定や前駆細胞の維持を規定し、状況依存的にRunxファミリー因子とのクロストークも行う。Sox9の発現や機能の破綻は、先天性骨格異常、線維化に伴うリモデリング、がんに関連する系譜可塑性に関与するとされ、発生および疾患関連の転写リプログラミングの機構研究における有用な結節点となっている。

Sox9 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Sox9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sox9 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Sox9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSox9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sox9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSox9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSox9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSox9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSox9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。