Sox-17 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401192-ACT

SOX17 kodiert den Transkriptionsfaktor Sox-17, ein DNA-bindendes Protein der High-Mobility-Group (HMG), das essenzielle Funktionen bei der Spezifizierung des definitiven Endoderms, der embryonalen Musterbildung und der Festlegung von Zellschicksalen erfüllt. In menschlichen Zellen ist Sox-17 in transkriptionelle Programme eingebunden, die mit WNT/β-Catenin, TGF-β/SMAD und Notch assoziiert sind, und reguliert dadurch Gene, die Differenzierung, epitheliale Organisation und das Entwicklungstiming steuern. Eine veränderte SOX17-Expression oder Störungen seiner Regulation wurden mit Defekten in endoderm-abgeleiteten Geweben sowie mit krebsrelevanten Phänotypen in Verbindung gebracht, darunter Veränderungen von Proliferation, Migration und der Stabilität des Zellzustands. Als Entwicklungsregulator wird SOX17 häufig als Marker und funktioneller Treiber in Studien zur Stammzelldifferenzierung und zum Cell-Fate-Mapping eingesetzt.

Sox-17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SOX17-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Sox-17 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SOX17-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SOX17-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Sox-17-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SOX17-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Sox-17-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Sox-17-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SOX17-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.