SOAT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417623-ACT

SOAT1 (esterol O-aciltransferase 1; ACAT1) é uma enzima de membrana do retículo endoplasmático que catalisa a esterificação do colesterol livre em ésteres de colesterol, sustentando a biogênese de gotículas lipídicas e a homeostase do colesterol celular. Ao amortecer o excesso de esteróis, o SOAT1 influencia a composição de membranas, o metabolismo de lipoproteínas e vias de sinalização sensíveis a esteróis, incluindo programas lipídicos regulados por SREBP e respostas inflamatórias em macrófagos. Alterações na atividade de SOAT1 têm sido associadas à formação de células espumosas, à desregulação lipídica neurodegenerativa e à reprogramação metabólica observada em múltiplos contextos tumorais, nos quais o acúmulo de ésteres de colesterol pode correlacionar-se com proliferação e adaptação ao estresse. Essas características biológicas tornam o SOAT1 um alvo útil para estudar o tráfego de esteróis, o armazenamento de lipídios e fenótipos impulsionados por colesterol em modelos celulares humanos relevantes.

SOAT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SOAT1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SOAT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SOAT1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SOAT1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SOAT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SOAT1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SOAT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SOAT1 em células tumorais com expressão de SOAT1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.