SMPDL3B Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430315-ACT

O gene murino Smpdl3b codifica a esfingomielina fosfodiesterase acid-like 3B (SMPDL3B), uma proteína do tipo fosfodiesterase associada à membrana, implicada na regulação do metabolismo de esfingolipídios e fosfolipídios na superfície celular e em compartimentos endolisossomais. A SMPDL3B tem sido associada à modulação da sinalização imune inata e à organização de microdomínios de membrana, influenciando processos como o tráfego de receptores, o ajuste fino de vias inflamatórias e a dinâmica do citoesqueleto. Em células mieloides e em células imunes residentes em tecidos, alterações na atividade de SMPDL3B podem modificar limiares de sinalização dependentes de lipídios que moldam respostas a estímulos microbianos e ao estresse tecidual. A desregulação do manejo de lipídios e da homeostase imunológica torna Smpdl3b um alvo relevante para estudos mecanísticos de fenótipos associados à inflamação e do crosstalk metabólico-imune em modelos murinos.

SMPDL3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Smpdl3b sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SMPDL3B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Smpdl3b em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Smpdl3b, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SMPDL3B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Smpdl3b nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SMPDL3B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SMPDL3B em células tumorais com expressão de Smpdl3b silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.