SMARCA4/Brg1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400168-NIC

SMARCA4（Brg1）は、SWI/SNF（BAF）クロマチンリモデリング複合体のATPアーゼ触媒コアをコードしており、ヌクレオソームを再配置することで、系譜決定、細胞周期進行、DNA損傷応答、分化を制御する転写プログラムを調節します。ATP依存的なクロマチンリモデリングを介して、SMARCA4はエンハンサーのアクセス可能性に影響を与え、配列特異的転写因子と協調して、発生過程およびストレス応答経路全体にわたる遺伝子発現を制御します。SMARCA4の機能破綻はクロマチン状態とゲノム制御を乱し、再発性の異常は、複数の腫瘍コンテキストにおける異常なエピジェネティック制御や腫瘍性の転写ネットワーク形成と関連しています。中枢的なクロマチン制御因子として、SMARCA4は、クロマチンアクセシビリティ解析、転写依存性マッピング、ならびにSWI/SNFサブユニットとPolycomb（ポリコーム）抑制が関与する合成致死ネットワークの研究で広く検討されています。

SMARCA4/Brg1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SMARCA4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SMARCA4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SMARCA4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SMARCA4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。