SMARCA4/Brg1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400168-ACT

SMARCA4（Brg1）は、SWI/SNF（BAF）クロマチンリモデリング複合体のATPアーゼ中核をコードしており、ヌクレオソームの位置を再配置することで、細胞のアイデンティティ、増殖、分化を制御する転写プログラムを調節します。ATP依存的なリモデリングを介して、SMARCA4はエンハンサーのアクセス可能性に影響を与え、系譜決定性転写因子と協調してRNAポリメラーゼIIの活性を調整します。また、主要な制御座位におけるクロマチン構造を形成することにより、DNA損傷シグナル伝達、複製ストレス応答、細胞周期チェックポイント制御などの過程にも関与します。SMARCA4機能の異常や喪失は複数の腫瘍で繰り返し認められ、SWI/SNF活性の変化が、エピジェネティックな再プログラミング、ゲノム不安定性、発生経路の異常な出力と関連することを示しています。

SMARCA4/Brg1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SMARCA4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SMARCA4/Brg1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SMARCA4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSMARCA4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SMARCA4/Brg1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSMARCA4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSMARCA4/Brg1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSMARCA4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSMARCA4/Brg1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。