Smad4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400110-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Smad4O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Smad4 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Smad4 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para SMAD4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Smad4 Anticorpo (B-8): sc-7966
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Smad4 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-400110-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smad4 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-400110-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SMAD4 codifica a Smad4, um co-mediador central da sinalização canônica de TGF-β e BMP, que forma complexos heteroméricos com SMADs reguladas por receptores para controlar programas de transcrição que governam proliferação, diferenciação e dinâmicas epitélio–mesênquima. Após a ativação do receptor induzida por ligante, complexos contendo Smad4 se acumulam no núcleo e integram sinais de vias como MAPK, WNT/β-catenina e PI3K/AKT para moldar a expressão gênica de modo dependente do contexto. A desregulação de SMAD4 altera o controle de crescimento dependente de TGF-β e a homeostase tecidual, e é frequentemente associada à perda de função supressora tumoral em malignidades gastrointestinais e pancreáticas. Como um hub de sinalização, SMAD4 é amplamente estudado por seus papéis no desenvolvimento, em estados transcricionais relacionados à fibrose e na regulação gênica imunomoduladora.
Smad4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SMAD4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SMAD4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SMAD4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SMAD4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.