Slfn5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435875-ACT

Slfn5 (schlafen 5) é uma proteína da família Schlafen em camundongos, implicada na regulação da sinalização imune inata e de programas transcricionais estimulados por interferon. As proteínas Schlafen são comumente associadas ao controle da progressão do ciclo celular, ao metabolismo de RNA e à modulação da diferenciação de células imunes, conectando a Slfn5 a vias que moldam respostas inflamatórias e estados de proliferação celular. Alterações na atividade de Schlafen têm sido relacionadas à desregulação da sinalização de citocinas e às interações entre tumor e sistema imune, tornando a Slfn5 uma ferramenta molecular útil para estudar a regulação imune em modelos de câncer e de doenças inflamatórias. Em sistemas murinos, a Slfn5 oferece um ponto acessível para investigar redes gênicas induzidas por interferon, dinâmicas de repressão/ativação transcricional e efeitos dependentes do contexto sobre o crescimento celular.

Slfn5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Slfn5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Slfn5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Slfn5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Slfn5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Slfn5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Slfn5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Slfn5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Slfn5 em células tumorais com expressão de Slfn5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.