Slfn14 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-415573-ACT

ヒトSLFN14は、Schlafenファミリーのメンバー14（Slfn14）をコードしており、転写後調節や造血系細胞におけるタンパク質合成の制御に関与すると考えられている、RNA結合タンパク質候補です。SLFNタンパク質は一般に、自然免疫シグナル伝達や細胞ストレス応答と関連し、リボソーム関連RNAの取り扱いや翻訳産物に影響を与えうる役割を担います。SLFN14は特に血小板生物学において重要で、SLFN14機能の変化は遺伝性血小板減少症や血小板機能異常の表現型と関連づけられています。これらの特性により、SLFN14は巨核球の成熟、血小板産生、ならびに免疫に隣接する調節プログラムにおける遺伝子発現制御を研究する上で有用な標的となります。

Slfn14 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLFN14の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Slfn14 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLFN14 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLFN14転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Slfn14の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLFN14遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSlfn14依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLFN14発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSlfn14経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。