SLC6A14 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-408198

Übersicht

SLC6A14 (auch bekannt als ATB0,+) kodiert einen natrium- und chloridabhängigen Transporter in der Plasmamembran, der die konzentrative Aufnahme neutraler und kationischer Aminosäuren vermittelt und dabei eine ausgeprägte Fähigkeit zum Transport eines breiten Substratspektrums einschließlich essenzieller Aminosäuren aufweist. Durch die Regulation der intrazellulären Aminosäureverfügbarkeit beeinflusst SLC6A14 Nährstoffsensorik- und metabolische Signalwege wie mTORC1 und prägt dadurch Zellwachstum, Redoxhomöostase und Stressanpassung. Seine Expression wurde mit der Transportphysiologie von Epithelien sowie mit veränderten Aminosäureflüssen in Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, in denen Nährstoffaufnahme und Stoffwechsel neu verdrahtet sind. Als Solute-Carrier an der Zelloberfläche stellt SLC6A14 einen gut untersuchbaren Angriffspunkt dar, um Beiträge des Aminosäuretransports zu Proliferation, Differenzierung und immun-metabolischen Wechselwirkungen zu analysieren.

Das SLC6A14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC6A14-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC6A14-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC6A14 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SLC6A14-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC6A14-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SLC6A14-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC6A14-Exone abzielen, die für die SLC6A14-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC6A14-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SLC6A14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SLC6A14 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC6A14-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SLC6A14 HDR-Plasmid (h) und SLC6A14 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC6A14-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC6A14-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.