Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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SLC13A5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407118
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- SLC13A5 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico SLC13A5, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: SLC13A5 Antibody (2G4): sc-293277
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
SLC13A5 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-407118 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
SLC13A5 codifica un trasportatore di citrato dipendente dal sodio (NaCT) che media l’assorbimento cellulare del citrato, collegando la disponibilità di citrato extracellulare al flusso di carbonio intracellulare. Influenzando i pool citosolici di citrato, SLC13A5 supporta la generazione di acetil-CoA per la lipogenesi de novo e l’acetilazione delle proteine, e può modulare le reti di sensing energetico che coordinano glicolisi, anaplerosi del ciclo di Krebs (TCA) ed equilibrio redox. L’attività di SLC13A5 è stata studiata soprattutto in tessuti metabolicamente attivi e nei neuroni, dove il trasporto del citrato interseca il metabolismo mitocondriale e la regolazione epigenetica tramite vie dipendenti dall’acetilazione. Alterazioni genetiche di SLC13A5 sono state associate a disfunzioni neurometaboliche e a cambiamenti dell’omeostasi di lipidi e glucosio, rendendolo rilevante per studi meccanicistici di fenotipi metabolici e neuronali.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SLC13A5 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC13A5 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC13A5 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC13A5 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SLC13A5.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC13A5 per lo studio della segnalazione di SLC13A5, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni SLC13A5 critici per la funzione di SLC13A5
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC13A5 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal SLC13A5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal SLC13A5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC13A5. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal SLC13A5 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR SLC13A5 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC13A5 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC13A5 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.