Six2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-402975-LAC

SIX2 codifica a Six2, um fator de transcrição homeobox que regula a manutenção de células progenitoras e a especificação de linhagens durante o desenvolvimento humano do rim e do complexo craniofacial. A Six2 atua em redes transcricionais que controlam a autorrenovação e a diferenciação de progenitores de néfron, integrando-se a vias como a sinalização WNT/β-catenina, FGF e BMP para equilibrar programas de crescimento e maturação. A expressão desregulada de SIX2 tem sido associada a distúrbios do desenvolvimento que afetam a morfogênese renal e o padrão craniofacial, e a atividade alterada de SIX2 também é estudada em contextos de plasticidade epitélio–mesenquimal e biologia tumoral. Como regulador nuclear que se liga ao DNA, a Six2 oferece um ponto acessível para dissecar circuitos de regulação gênica que governam o estado de diferenciação e a identidade tecidual.

As Partículas de Ativação Lentivirais Six2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SIX2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Six2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SIX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Six2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SIX2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.