Six2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-402975-LAC

SIX2 kodiert Six2, einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der während der menschlichen Nieren- und kraniofazialen Entwicklung die Aufrechterhaltung von Vorläuferzellen und die Festlegung von Zelllinien reguliert. Six2 wirkt in transkriptionellen Netzwerken, die Selbsterneuerung und Differenzierung von Nephron-Vorläuferzellen steuern, und integriert dabei Signalwege wie WNT/β-Catenin-, FGF- und BMP-Signaling, um Wachstums- und Reifungsprogramme auszubalancieren. Eine dysregulierte SIX2-Expression wurde mit Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht, die die renale Morphogenese und die kraniofaziale Musterbildung betreffen; zudem wird eine veränderte SIX2-Aktivität auch im Kontext epithelial-mesenchymaler Plastizität und der Tumorbiologie untersucht. Als nukleärer, DNA-bindender Regulator stellt Six2 einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um genregulatorische Schaltkreise zu analysieren, die Differenzierungszustand und Gewebeidentität bestimmen.

Six2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SIX2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Six2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SIX2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Six2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SIX2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.