Siva Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403496-ACT

O gene humano **SIVA1** codifica a proteína **Siva**, um adaptador pró-apoptótico originalmente identificado por meio de sua interação com membros da família de receptores de TNF, conectando sinais extracelulares de morte à sinalização intracelular. A Siva participa da regulação da apoptose e das respostas ao estresse celular, com papéis descritos na modulação da atividade de **NF-κB** e na integração de sinais que influenciam a integridade mitocondrial e a ativação de caspases. Ao moldar decisões de destino celular e vias de sobrevivência, a dinâmica de expressão de **SIVA1** é frequentemente investigada em contextos de transformação oncogênica, redes de supressores tumorais e sinalização relacionada ao sistema imune. A desregulação da atividade de **SIVA1/Siva** tem sido associada a alterações na sensibilidade a estímulos apoptóticos e a mudanças na proliferação e nas respostas a dano no DNA, sustentando seu uso como um nó mecanístico em modelos relevantes para doenças.

Siva O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIVA1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Siva O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIVA1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIVA1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Siva. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIVA1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Siva no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Siva em células tumorais com expressão de SIVA1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.