SIRT7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401401-ACT

A SIRT7 é uma desacetilase/deacilase nuclear dependente de NAD+ da família das sirtuínas que regula a organização da cromatina, a transcrição do DNA ribossômico e a biogênese de ribossomos dirigida pela RNA polimerase I. Ao modular substratos histônicos e não histônicos, a SIRT7 conecta o controle epigenético às respostas celulares ao estresse, à homeostase metabólica e à manutenção da integridade do genoma, incluindo vias de resposta a danos no DNA e ao estresse de replicação. A atividade alterada da SIRT7 tem sido associada à proliferação desregulada, à proteostase e à função mitocondrial, tornando-a relevante para estudos de sinalização oncogênica, fenótipos relacionados ao envelhecimento e disfunções inflamatórias ou metabólicas. Assim, a SIRT7 humana é amplamente utilizada como um ponto-chave para investigar programas transcricionais que acoplam a função nucleolar ao controle do ciclo celular e à adaptação ao estresse.

SIRT7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SIRT7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SIRT7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SIRT7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SIRT7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SIRT7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SIRT7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SIRT7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SIRT7 em células tumorais com expressão de SIRT7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.