SIRT4 Double Nickase Plasmid (r): sc-437316-NIC
- Zielspezies: rat
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SIRT4 Double Nickase Plasmid (r) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SIRT4 Double-Nickase-Plasmid (r) und SIRT4 Double-Nickase-Plasmid (r2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SIRT4 Double Nickase Plasmid (r) | sc-437316-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SIRT4 Double Nickase Plasmid (r2) | sc-437316-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SIRT4 ist ein mitochondriales Sirtuin, das als NAD+-abhängiger Regulator der metabolischen Homöostase wirkt und dabei Nährstoffsensorik, die Aktivität mitochondrialer Enzyme und den zellulären Energiefluss beeinflusst. In Rattenzellen moduliert SIRT4 Prozesse wie Glutaminverwertung, Fettsäureoxidation und Reaktionen auf oxidativen Stress über die posttranslationale Kontrolle zentraler mitochondrialer Zielproteine und ist damit mit übergeordneten AMPK–mTOR-Signalwegen sowie Pfaden der mitochondrialen Qualitätskontrolle verknüpft. Eine veränderte SIRT4-Aktivität wurde im Kontext mitochondrialer Dysfunktion und metabolischen Remodelings untersucht, wobei Änderungen des Redox-Gleichgewichts und der bioenergetischen Kapazität die Anfälligkeit gegenüber Stress beeinflussen können. Diese Eigenschaften machen SIRT4 zu einem geeigneten Knotenpunkt für mechanistische Studien zur mitochondrialen Regulation, metabolischen Reprogrammierung und stressadaptiven Signalnetzwerken.
SIRT4 Das Double-Nickase-Plasmid (r) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des -Lokus in rat-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die -Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit -Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.