SIRT3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400675-NIC

SIRT3 codifica uma desacetilase mitocondrial dependente de NAD⁺ que regula a acetilação de proteínas para coordenar o metabolismo oxidativo, o equilíbrio redox e o controle de qualidade mitocondrial. Ao desacetilar alvos envolvidos no ciclo do TCA, na β-oxidação de ácidos graxos e na defesa antioxidante, a SIRT3 influencia a produção de ATP, o manejo de espécies reativas de oxigênio e vias de adaptação ao estresse. A atividade da SIRT3 intersecciona programas de detecção de nutrientes e de homeostase mitocondrial, incluindo a remodelação metabólica ligada a AMPK e PGC-1α e processos associados à mitofagia. A desacetilação dependente de SIRT3 desregulada tem sido associada a alterações na função mitocondrial observadas em distúrbios metabólicos, neurodegeneração, respostas cardiovasculares ao estresse e reprogramação metabólica relacionada ao câncer, reforçando sua ampla relevância na biologia das doenças.

SIRT3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus SIRT3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de SIRT3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função SIRT3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com SIRT3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.