SIMPL CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-425749

概要

Irak1bp1 は、IRAK1 の下流における Toll 様受容体および IL-1 受容体シグナル伝達に関与する細胞質アダプターである SIMPL（signaling molecule that interacts with Pelle-like kinase）をコードしています。SIMPL は、自然免疫の活性化、炎症性遺伝子発現、ならびに細胞ストレス応答を形作る NF-κB 依存的な転写プログラムの調節に関連づけられています。マウスの系では、SIMPL 関連シグナルの攪乱が、慢性炎症や免疫調節異常の表現型に関係するサイトカイン駆動性経路に影響し得ることが示されています。これらの特性により Irak1bp1 は、骨髄系細胞および間質細胞モデルにおいて、刺激依存的な NF-κB シグナル伝達ダイナミクスや他の炎症経路とのクロストークを解析するための有用な標的となります。

SIMPL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるIrak1bp1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Irak1bp1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Irak1bp1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、SIMPLタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、SIMPLシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Irak1bp1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• SIMPLの機能に不可欠なIrak1bp1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Irak1bp1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• SIMPL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSIMPL CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Irak1bp1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  SIMPL HDRプラスミド（m）および SIMPL HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIrak1bp1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIrak1bp1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。