SHIP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400619-ACT

INPP5D codifica a SHIP-1 (fosfatase de inositol 5 contendo domínio SH2 1), um regulador negativo do sinalizamento de fosfoinositídeos enriquecido em células hematopoéticas, que desfosforila PI(3,4,5)P3 a PI(3,4)P2. Ao modular o recrutamento e a ativação dependentes de PIP3 de AKT e de efetores relacionados, a SHIP-1 ajusta a sinalização a jusante de receptores imunes, incluindo receptores Fc, receptores de citocinas e vias do receptor de célula B, moldando sobrevivência celular, proliferação, quimiotaxia e respostas inflamatórias. Esse nó regulatório se cruza com as redes de sinalização PI3K–AKT, MAPK e da imunidade inata que governam os estados de ativação de células mieloides e linfoides. A atividade e a expressão desreguladas de INPP5D/SHIP-1 têm sido associadas a sinalização imune aberrante e a fenótipos ligados à inflamação, sustentando seu uso em estudos mecanísticos de homeostase imune e de circuitos de sinalização relevantes para doenças.

SHIP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de INPP5D sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SHIP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus INPP5D em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição INPP5D, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SHIP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus INPP5D nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SHIP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SHIP-1 em células tumorais com expressão de INPP5D silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.