Shc Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400914-ACT

SHC1 codifica a proteína adaptadora Shc, um transdutor central de sinalização que conecta tirosina-quinases receptoras ativadas e receptores de citocinas a cascatas a jusante, incluindo RAS–MAPK/ERK e PI3K–AKT. Por meio de seus domínios PTB e SH2, a Shc coordena a montagem, dependente de fosforilação, de complexos de sinalização que regulam proliferação, diferenciação, sobrevivência e respostas ao estresse celular. A sinalização dependente de SHC1 também interage com vias de insulina/IGF e influencia a sinalização mitocondrial e de estresse oxidativo, contribuindo para alterações dependentes do contexto no crescimento celular e na apoptose. A desregulação da sinalização de SHC1/Shc tem sido associada à atividade aberrante de vias de fatores de crescimento na biologia do câncer e a dinâmicas de sinalização alteradas em modelos de pesquisa relacionados ao metabolismo e à neurodegeneração.

Shc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SHC1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Shc O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SHC1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SHC1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Shc. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SHC1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Shc no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Shc em células tumorais com expressão de SHC1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.