SGK CRISPR Activationプラスミド (m): sc-422906-ACT

マウスSgk1は、血清／グルココルチコイド誘導性キナーゼ（SGK）をコードしており、グルココルチコイド、増殖因子、ならびに細胞ストレスによって誘導されるAGCファミリーのセリン／スレオニンキナーゼである。SGKは、PI3K–PDK1シグナル伝達を統合し、イオントランスポーターおよびチャネルの制御、転写プログラム、生存経路といった下流の調節へとつなげる。これには、FOXO依存的な遺伝子発現の調節や、mTOR関連の栄養感知機構とのクロストークも含まれる。これらの過程を通じて、上皮性ナトリウム輸送、浸透圧および酸化ストレス応答、細胞周期進行に影響を及ぼす。SGK活性の異常は、病的リモデリングや炎症性シグナル伝達の文脈と関連づけられており、そのためSgk1は、哺乳類組織におけるストレス適応経路の作用機序を研究する上で有用なノードとなる。

SGK CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Sgk1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SGK CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Sgk1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSgk1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SGKの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSgk1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSGK依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSgk1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSGK経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。