SF2/ASF CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400737-ACT

ヒトSRSF1は、セリン／アルギニンに富むスプライシング因子SF2/ASFをコードしており、スプライソソームの中核構成要素として、恒常的および選択的pre-mRNAスプライシング、mRNA輸送、翻訳を制御します。SF2/ASFは、細胞周期の進行、アポトーシス、ストレス応答を制御する経路にわたってアイソフォーム選択の様式形成に関与し、さらに、スプライシング依存的に経路構成要素を組み替えることで、PI3K–AKTやMAPKなどのシグナル伝達ネットワークにも影響を及ぼし得ます。SRSF1の発現量や活性の変化は、がん生物学や神経変性を含む複数の疾患関連コンテキストで観察される、トランスクリプトームの広範な変化、ゲノム不安定性、ならびにプロテオーム出力の破綻と関連しています。代表的なスプライシング制御因子として、SRSF1はエクソン定義、RNA結合特異性、転写とスプライシングの共役における役割について頻繁に研究されています。

SF2/ASF CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SRSF1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SF2/ASF CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SRSF1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSRSF1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SF2/ASFの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSRSF1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSF2/ASF依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSRSF1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSF2/ASF経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。