SEZ6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422895

Panoramica

Sez6 codifica per seizure-related 6 homolog (SEZ6), una proteina transmembrana di tipo I arricchita nel sistema nervoso che contribuisce alla differenziazione neuronale, all’arborizzazione dendritica e alla formazione delle sinapsi. SEZ6 partecipa a vie di traffico di membrana e di processamento proteolitico, incluso lo shedding dell’ectodominio, che può influenzare la segnalazione cellula-cellula e i programmi di crescita dei neuriti. Nei modelli murini, un’alterata espressione o funzione di Sez6 è stata associata a cambiamenti nella connettività sinaptica e nell’equilibrio eccitatorio/inibitorio, a supporto della sua rilevanza per fenotipi neuroevolutivi e legati alle crisi epilettiche. In quanto regolatore associato alla superficie neuronale, SEZ6 è spesso studiata nel contesto della maturazione dei circuiti e della plasticità dipendente dall’attività.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO SEZ6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Sez6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Sez6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Sez6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina SEZ6.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Sez6 per lo studio della segnalazione di SEZ6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Sez6 critici per la funzione di SEZ6
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Sez6 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal SEZ6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal SEZ6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Sez6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal SEZ6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR SEZ6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Sez6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Sez6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.