Plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA3G (h): sc-406077

Présentation

SEMA3G code la sémaphorine‑3G, un signal de guidage sécrété qui transmet des signaux via des complexes récepteurs neuropiline/plexine afin de réguler le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire et l’organisation des tissus. Outre ses rôles dans le guidage axonal et le neurodéveloppement, SEMA3G influence le bourgeonnement angiogénique et lymphatique et peut moduler le comportement des cellules endothéliales et immunitaires par une signalisation dépendante des sémaphorines. Ces processus recoupent des voies contrôlant l’adhésion, la motilité et le remodelage vasculaire, faisant de SEMA3G un nœud pertinent pour l’étude de la biologie du développement et de la régulation, par le microenvironnement, du mouvement cellulaire. Des altérations de la signalisation des sémaphorines ont été associées à la progression du cancer et à des phénotypes liés aux métastases, ainsi qu’à des dysfonctionnements vasculaires et inflammatoires, ce qui étaye l’étude de SEMA3G dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SEMA3G (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SEMA3G dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SEMA3G, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SEMA3G à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SEMA3G.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SEMA3G pour l'étude de la signalisation de SEMA3G, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SEMA3G essentiels à la fonction de SEMA3G
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SEMA3G pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SEMA3G plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SEMA3G plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SEMA3G. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SEMA3G plasmide HDR (h) et le SEMA3G (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SEMA3G pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SEMA3G définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.