Selenoprotein P Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417457-ACT

SELENOP codifica a selenoproteína P, uma glicoproteína secretada que atua como um dos principais fatores de transporte de selênio no plasma e dá suporte à distribuição sistêmica de selênio para tecidos periféricos. Ao fornecer selênio para a biossíntese de selenoenzimas, o SELENOP contribui para a homeostase redox celular, a defesa antioxidante e a proteção contra estresse oxidativo e inflamatório, com relevância para a função hepática e a regulação metabólica. A expressão alterada de SELENOP tem sido associada a respostas desreguladas ao estresse oxidativo e a fenótipos de doenças metabólicas, sendo frequentemente investigada no contexto da sinalização da insulina, do metabolismo lipídico e de vias inflamatórias. Como um fator circulante semelhante a uma hepatocina, a selenoproteína P também é utilizada como um marcador molecular de programas secretórios hepáticos e do controle transcricional responsivo a nutrientes.

Selenoprotein P O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SELENOP sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Selenoprotein P O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SELENOP em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SELENOP, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Selenoprotein P. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SELENOP nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Selenoprotein P no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Selenoprotein P em células tumorais com expressão de SELENOP silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.