SELENBP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422870-ACT

O gene murino **Selenbp1** codifica a proteína 1 de ligação ao selênio (**SELENBP1**), uma proteína citosólica conservada implicada no manuseio celular do selênio e na homeostase redox. A expressão de SELENBP1 é frequentemente relacionada ao estado metabólico e à diferenciação, com conexões descritas com respostas ao estresse oxidativo, função mitocondrial e regulação de espécies reativas de enxofre/selênio. Alterações nos níveis de SELENBP1 têm sido associadas a mudanças na proliferação celular e na invasividade em oncologia, e também foram estudadas em contextos de inflamação e lesão tecidual nos quais o equilíbrio redox é perturbado. Como marcador do estado metabólico e oxidativo celular, SELENBP1 é útil para dissecar vias que conectam a biologia do selênio a programas transcricionais e a fenótipos de adaptação ao estresse.

SELENBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Selenbp1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SELENBP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Selenbp1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Selenbp1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SELENBP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Selenbp1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SELENBP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SELENBP1 em células tumorais com expressão de Selenbp1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.