Sel-1L CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403861-ACT

SEL1Lは、分泌タンパク質や膜タンパク質のミスフォールド体を認識し、逆輸送（レトロトランスロケーション）し、ユビキチン依存的なプロテアソーム分解へと導くER関連分解（ERAD）装置の中核因子であるSel-1Lをコードする。Sel-1LはHRD1と協調して機能し、この役割を通じてERのプロテオスタシスを維持するとともに、小胞体ストレス応答（UPR）シグナルの調節や、分化およびストレス適応に関与する多様な基質タンパク質の安定性にも影響を与える。SEL1Lの活性は、ERの品質管理、ユビキチンリガーゼ複合体、分泌経路の恒常性を制御する経路と交差しており、これらの過程は慢性的なERストレスを特徴とする疾患でしばしば障害される。ERAD能力の破綻やSEL1L発現の変化は、プロテオトキシックストレスが細胞の運命決定に結びつく機序として、神経変性、代謝異常、腫瘍生物学に関する研究で検討されてきた。

Sel-1L CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SEL1Lの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Sel-1L CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SEL1L 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSEL1L転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Sel-1Lの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSEL1L遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSel-1L依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSEL1L発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSel-1L経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。