SDHD CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403276-ACT

ヒトSDHDは、コハク酸デヒドロゲナーゼ（ミトコンドリア複合体II）の小型の膜貫通サブユニットDをコードしており、SDHの触媒ドメインをミトコンドリア内膜に固定し、コハク酸からユビキノンへの電子伝達を支える中核成分です。TCA（トリカルボン酸）回路と呼吸鎖を結び付けることで、SDHDは酸化的リン酸化、細胞のレドックスバランス、ならびにコハク酸量の制御を含む代謝物恒常性に寄与します。SDHDの機能破綻や発現変動は、ミトコンドリア機能障害とコハク酸の蓄積を促し、HIF関連の転写プログラムなど、酸素感知およびストレス応答経路を介したシグナル伝達を再構築し得ます。SDHDはSDH欠損腫瘍の生物学やミトコンドリア代謝調節異常と強く関連しており、遺伝子型と代謝の関係を研究するうえで重要な標的です。

SDHD CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SDHDの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SDHD CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SDHD 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSDHD転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SDHDの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSDHD遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSDHD依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSDHD発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSDHD経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。