Scratch1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410173

概要

SCRT1は、神経系細胞系譜において主として転写抑制因子として働く亜鉛フィンガー型転写因子Scratch1をコードし、神経細胞の分化・移動・成熟プログラムの協調的制御に寄与する。Scratch1は、プロニューラルbHLH因子やEMT（上皮間葉転換）に関連する転写制御と交差する遺伝子制御ネットワークの中で機能し、発生過程における細胞状態の遷移や細胞骨格ダイナミクスの形成に関与する。系譜特異的遺伝子発現の調節と非神経系プログラムの抑制を通じて、SCRT1は神経細胞アイデンティティの維持および状況依存的な増殖制御に貢献する。SCRT1に関連する転写プログラムの破綻は、神経発達表現型の研究や、発生制御因子が分化状態や浸潤性に影響を与えるためにしばしば再利用されるがん生物学の分野で検討されている。

Scratch1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSCRT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SCRT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SCRT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Scratch1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Scratch1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SCRT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Scratch1の機能に不可欠なSCRT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SCRT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Scratch1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびScratch1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SCRT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Scratch1 HDRプラスミド（h）および Scratch1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSCRT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSCRT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。