SCO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402686

Übersicht

SCO2 codiert ein mit der inneren Mitochondrienmembran assoziiertes Metallochaperon, das für die Biogenese der Cytochrom‑c‑Oxidase (Komplex IV) erforderlich ist, indem es Kupfer an die COX2‑Untereinheit liefert und den Zusammenbau der Atmungskette unterstützt. Über seine Rolle in der oxidativen Phosphorylierung trägt SCO2 zur Aufrechterhaltung des mitochondrialen Membranpotentials, der ATP‑Produktion und der Redox‑Homöostase bei und verknüpft es damit mit dem zellulären Energiestoffwechsel und Stressantworten. Eine Störung von SCO2 beeinträchtigt die Aktivität von Komplex IV und kann Zellen in veränderte Stoffwechselzustände verschieben, wodurch Prozesse wie der Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und die Empfindlichkeit gegenüber Apoptose beeinflusst werden. Pathogene Varianten im menschlichen SCO2 sind mit schweren Phänotypen einer mitochondrialen Enzephalokardiomyopathie sowie mit Kardiomyopathie assoziiert, was SCO2 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung von Mechanismen mitochondrialer Erkrankungen macht.

Das SCO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SCO2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SCO2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SCO2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SCO2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SCO2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SCO2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SCO2-Exone abzielen, die für die SCO2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SCO2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SCO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SCO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SCO2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SCO2 HDR-Plasmid (h) und SCO2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SCO2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SCO2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.