Sclerostin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401527

Übersicht

SOST kodiert Sclerostin, ein sezerniertes Glykoprotein, das hauptsächlich von Osteozyten produziert wird und als zentraler negativer Regulator der Knochenbildung wirkt. Sclerostin bindet an die Korezeptoren LRP5/6 und antagonisiert dadurch die kanonische Wnt/β‑Catenin-Signalübertragung, wodurch es die Osteoblastendifferenzierung, die Ablagerung der Knochenmatrix und das Skelettremodeling moduliert. Über die Kontrolle Wnt-gesteuerter Transkriptionsprogramme beeinflusst SOST die Kopplung von Osteoblasten und Osteoklasten sowie die Mineralhomöostase. Eine fehlregulierte SOST-Aktivität ist mit veränderten Phänotypen der Knochenmasse assoziiert und wird häufig im Kontext der Osteoporoseforschung, skelettaler Dysplasien und von Veränderungen des Knochenumbaus untersucht, wie sie bei entzündlichen und metabolischen Erkrankungen auftreten.

Das Sclerostin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SOST-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SOST-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SOST nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Sclerostin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SOST-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Sclerostin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SOST-Exone abzielen, die für die Sclerostin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SOST-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Sclerostin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Sclerostin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SOST-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Sclerostin HDR-Plasmid (h) und Sclerostin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SOST-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SOST-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.