SCD5 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402860-ACT

SCD5 はステアロイル CoA デサチュラーゼ 5 をコードしており、これは小胞体に局在する酵素で、飽和脂肪酸アシル CoA に cis 型の二重結合を導入して一価不飽和脂肪酸を生成します。膜脂質の組成を形成し、複合脂質合成の基質を供給することで、SCD5 は脂質恒常性、膜動態、ならびに脂質リモデリングに関連する代謝シグナル伝達ネットワークに影響を与えます。デサチュラーゼ活性の変化は細胞のストレス応答や脂質依存的シグナル伝達を変動させ得るため、脂質の取り扱いが厳密に制御されている組織における代謝制御の研究において、SCD5 は重要な標的となります。脂肪酸の不飽和化パターンの破綻は、代謝疾患やがん生物学における疾患関連表現型と関連づけられており、状況依存的な脂質経路の攪乱という観点から SCD5 を検討する意義を支持します。

SCD5 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SCD5の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SCD5 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SCD5 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSCD5転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SCD5の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSCD5遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSCD5依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSCD5発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSCD5経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。