SCD4 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435929-ACT

O gene Scd4 de camundongo codifica a estearoil-CoA dessaturase 4 (SCD4), uma enzima associada ao retículo endoplasmático que introduz uma dupla ligação cis em acil-CoAs de ácidos graxos saturados para gerar ácidos graxos monoinsaturados. Ao moldar o equilíbrio celular entre lipídios saturados e insaturados, a SCD4 influencia a fluidez de membrana, a biogênese de gotículas lipídicas e a disponibilidade de substratos para a síntese de triglicerídeos, fosfolipídios e ésteres de colesterol. A atividade de Scd4 se cruza com programas transcricionais lipogênicos regulados pela sinalização SREBP/INSIG e se integra a vias metabólicas que controlam a oxidação de ácidos graxos e a homeostase energética. A remodelação lipídica dependente de dessaturases, quando alterada, é relevante para estudos de disfunção metabólica e inflamação, nos quais mudanças no grau de saturação lipídica podem modular respostas de estresse do RE e os sinais gerados a jusante.

SCD4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Scd4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SCD4 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Scd4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Scd4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SCD4. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Scd4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SCD4 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SCD4 em células tumorais com expressão de Scd4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.