SCAP Double Nickase Plasmid (h): sc-401474-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SCAP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SCAP Double-Nickase-Plasmid (h) und SCAP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SCAP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SCAP Double Nickase Plasmid (h) | sc-401474-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SCAP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401474-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SCAP (SREBF-Chaperon) ist ein Membranprotein des endoplasmatischen Retikulums, das SREBP-Transkriptionsfaktoren bei Sterolmangel vom ER zum Golgi begleitet und dadurch deren proteolytische Aktivierung sowie die anschließende nukleäre Transkription von Genen des Lipidstoffwechsels ermöglicht. Über seine Interaktion mit INSIG-Proteinen vermittelt SCAP eine Rückkopplungskontrolle der Cholesterin- und Fettsäurebiosynthese und koordiniert die zelluläre Lipidhomöostase mit der Membranbiogenese. Diese SCAP–SREBP-Achse beeinflusst ER-Stressantworten, den Lipoproteinstoffwechsel und metabolische Reprogrammierung und macht SCAP zu einem zentralen Knotenpunkt für die Untersuchung dyslipidämieassoziierter Biologie sowie lipidabhängiger Wachstumssignalwege in menschlichen Zellen. Eine veränderte SCAP/SREBP-Aktivität wird häufig im Kontext von Fettleber (hepatischer Steatose), atherosklerose-relevanter Lipidverarbeitung und krebsassoziierter Lipogenese untersucht.
SCAP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SCAP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SCAP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SCAP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SCAP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.