SAP 49 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407057-NIC

SF3B4は、pre-mRNAスプライシングの過程でブランチポイント配列の認識を助けるU2小核リボヌクレオタンパク質（snRNP）内のSF3bサブコンプレックスの中核構成要素であるSAP 49をコードしている。スプライソソームの組み立てやスプライス部位選択を支えることで、SAP 49はトランスクリプトームの完全性に寄与し、さらにRNAプロセシング、細胞周期プログラム、ストレス応答の下流制御にも関与する。SF3B4依存的スプライシングの攪乱は、がんや発生異常を含む複数の疾患状況で観察されるアイソフォーム発現の変化や、遺伝子制御ネットワークの広範な変動と関連している。スプライソソーム因子として、SAP 49はスプライシング忠実度の機構、選択的スプライシング制御、遺伝子型からアイソフォームへの関係性の解明において、しばしば研究対象となっている。

SAP 49 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における SF3B4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、SF3B4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、SF3B4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、SF3B4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。