SAP 49 Double Nickase Plasmid (h): sc-407057-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SAP 49 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SAP 49 Double-Nickase-Plasmid (h) und SAP 49 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SF3B4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SAP 49: sc-365570
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SAP 49 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407057-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAP 49 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407057-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SF3B4 kodiert SAP 49, eine zentrale Komponente des SF3b-Subkomplexes innerhalb des U2-snRNP (kleines nukleäres Ribonukleoprotein), der bei der Erkennung von Branchpoint-Sequenzen während des Prä-mRNA-Spleißens hilft. Durch die Unterstützung der Spleißosomenassemblierung und der Auswahl von Spleißstellen trägt SAP 49 zur Integrität des Transkriptoms sowie zur nachgeschalteten Regulation der RNA-Prozessierung, von Zellzyklusprogrammen und Stressantworten bei. Störungen des SF3B4-abhängigen Spleißens werden mit veränderter Isoform-Expression und weitreichenden Veränderungen in genregulatorischen Netzwerken in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter Krebserkrankungen und Entwicklungsstörungen. Als Spleißosomenfaktor wird SAP 49 häufig im Zusammenhang mit Mechanismen der Spleißtreue, der Kontrolle alternativen Spleißens und der Beziehung zwischen Genotyp und Isoform untersucht.
SAP 49 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SF3B4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SF3B4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SF3B4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SF3B4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.